國(guó)食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2008第3400624號(hào)
產(chǎn)品特點(diǎn)：
精子核蛋白染色試劑盒（苯胺藍(lán)染色法）要用于成年男性精子核蛋白的染色，便于醫(yī)生顯微鏡下觀察成熟精子及計(jì)算不成熟精子比例。評(píng)估精子成熟率對(duì)生育的影響。
本試劑無(wú)須特殊儀器，簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確。
包裝規(guī)格：20人份/盒、40人份/盒。
精子核蛋白染色試劑盒（苯胺藍(lán)染色法）的詳細(xì)資料：
【精子核蛋白染色試劑盒（苯胺藍(lán)染色法）品 名】
精子權(quán)威五聯(lián)檢：精子核蛋白染色試劑盒（苯胺藍(lán)染色法）
【研發(fā)依據(jù)】
正常情況下，與精核DNA結(jié)合的堿性蛋白（核蛋白）將經(jīng)歷從組蛋白到魚精蛋白的自然成熟過程，這種成熟后的魚精蛋白對(duì)精子基因（DNA）具有特殊保護(hù)作用。
組蛋白被魚精蛋白逐漸取代的過程，稱之為精子核蛋白組型轉(zhuǎn)換，這種組型轉(zhuǎn)換具有重要的生理意義。但當(dāng)核蛋白組型轉(zhuǎn)換異常可引起男性不育或胚胎早期夭折流產(chǎn)，其機(jī)理為：①精子DNA不穩(wěn)定且易受損傷而難以受孕；②一旦受精，由于核蛋白組型異常，精子核不能正常解聚，從而影響了雌雄原核的融合；③胚胎不能正常發(fā)育，造成胚胎夭折而流產(chǎn)。
【精子核蛋白染色試劑盒（苯胺藍(lán)染色法）預(yù)期用途】
主要用于成年男性精子核蛋白的染色，以此評(píng)估成年男性精子成熟比例，可評(píng)價(jià)男性生育功能。
【試劑特點(diǎn)】無(wú)須特殊儀器，簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確。
【精子核蛋白染色試劑盒（苯胺藍(lán)染色法）檢驗(yàn)原理】
成熟精子的核蛋白成份為魚精蛋白，富含精氨酸和胱氨酸殘基；不成熟精子的核蛋白成份為組蛋白，富含賴氨酸殘基。酸性條件下，苯胺藍(lán)與賴氨酸殘基結(jié)合生成紫藍(lán)色化合物，從而指示不成熟核蛋白的存在，而核蛋白成熟的精子則染成紅色。
【組成成份】
試劑主要由苯胺藍(lán)、氧雜蒽、冰醋酸、磷酸鹽緩沖液等配制而成。
規(guī)格
組 份
20人份/盒
40人份/盒
A液（10×濃縮洗滌液）
10ml×1瓶
20ml×1瓶
B液（固定液）
5ml×1瓶
10ml×1瓶
C液（染色液）
5ml×1瓶
10ml×1瓶
D液（10×濃縮洗脫液）
10ml×1瓶
20ml×1瓶
E液（復(fù)染液）
5ml×1瓶
10ml×1瓶
防脫載玻片
20片
40片
說明書
1份
1份
【樣本要求】液化后的新鮮精液標(biāo)本
【精子核蛋白染色試劑盒（苯胺藍(lán)染色法）操作方法】
1．試劑的準(zhǔn)備
1）洗滌工作液的配制：A液（10×濃縮洗滌液）以蒸餾水10倍稀釋，4℃保存?zhèn)溆茫?br style="white-space: normal;"/>2）洗脫工作液的配制：D液（10×濃縮洗脫液）以蒸餾水10倍稀釋，4℃保存?zhèn)溆谩?br style="white-space: normal;"/>2．樣本準(zhǔn)備
1）新鮮精液標(biāo)本置于37℃恒溫水浴箱中完全液化。
2）精子的洗滌及稀釋，方法如下： ①在Eppendorf管中加入0.2—0.5ml的精液和洗滌工作液1ml，以一次性吸管反復(fù)吹打精子數(shù)次后，2000轉(zhuǎn)離心5min，棄去上清液，保留管底精子沉淀團(tuán)； ②在Eppendorf管中加入洗滌工作液1.5ml，以一次性吸管反復(fù)吹打精子數(shù)次后，2000轉(zhuǎn)離心5min，棄去上清液，保留管底精子沉淀團(tuán)； ③再次重復(fù)②的操作，離心結(jié)束后，棄去上清液。④在Eppendorf管中加入洗滌工作液約0.1—0.2ml，混合精子懸液。
3．檢測(cè)步驟
1）取上述已制備好的精子懸液15μl，均勻涂布于防脫載玻片上，自然干燥。
2）在涂有待測(cè)精子的涂片區(qū)內(nèi)，滴加B液（固定液）2—3滴，室溫反應(yīng)2min。
3）以流水輕輕沖去載玻片上的試劑（注意控制水流速度，以免洗脫涂片區(qū)內(nèi)的精子），甩去多余水份（注意防止涂片干燥）。
4）在涂有待測(cè)精子的涂片區(qū)內(nèi)，滴加C液（染色液）2—4滴，室溫反應(yīng)5min。
5）以流水輕輕沖去載玻片上的試劑（注意控制水流速度，以免洗脫涂片區(qū)內(nèi)的精子），并甩去多余水份（注意防止涂片干燥）。
6）將載玻片豎直插入已盛有洗脫工作液的反應(yīng)池中，使待測(cè)標(biāo)本涂片區(qū)完全浸沒于洗脫工作液中，室溫反應(yīng)5min。
7）以流水輕輕沖去載玻片上的試劑（注意控制水流速度，以免洗脫涂片區(qū)內(nèi)的精子），并甩去多余水份（注意防止涂片干燥）。
8）在涂片區(qū)內(nèi)滴加E液（復(fù)染液）2—4滴，室溫反應(yīng)5min。
9）以流水輕輕沖去載玻片上的試劑（注意控制水流速度，以免洗脫涂片區(qū)內(nèi)的精子），迅速吹干玻片。（如果需要長(zhǎng)久保存該涂片樣本，可選擇完成以下脫水步驟：分別將組織片依次置于70、90和100乙醇中各2min，晾干。）
10）鏡檢。
【精子核蛋白染色試劑盒（苯胺藍(lán)染色法）染色結(jié)果】
核蛋白不成熟的精子染色呈紫藍(lán)色或紫色，核蛋白成熟的精子染色呈紅色。
【參考值】 DFI（單鏈DNA精子）＜10為正常；當(dāng)DFI＞25時(shí)，受精率＜20。
【精子核蛋白染色試劑盒（苯胺藍(lán)染色法）注意事項(xiàng)】
1．受試者應(yīng)按照WHO技術(shù)規(guī)范采集精液標(biāo)本。
2．若精液標(biāo)本粘稠度高或液化不完全，可導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果非特異性假陽(yáng)性。需要預(yù)先降低精液粘度或促進(jìn)精液完全液化后，才能用于檢測(cè)。
3. 精子密度過高可能導(dǎo)致脫色不均勻，從而對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生不良影響；精子密度過低則不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果；涂片時(shí)應(yīng)避免涂布過于稠密。
4. 精子洗滌不充分可影響顯微鏡觀察結(jié)果。
5. 染紫藍(lán)色精子為核蛋白不成熟精子，染紅色精子為核蛋白成熟的精子。由于精子核蛋白存在組蛋白-魚精蛋白的過渡期，因此此類精子頭部呈淡藍(lán)色或紫色；精子頭部局部染淡藍(lán)色或紫色、頂體膜邊緣染紫藍(lán)色，均是精子不夠成熟的表現(xiàn)。
6. 鏡下觀察結(jié)果時(shí)，不要在精子堆集分布的區(qū)域計(jì)數(shù)，應(yīng)選擇精子散在分布的區(qū)域進(jìn)行計(jì)數(shù)。
7. 受檢者所有樣品均應(yīng)視為潛在的傳染源，檢測(cè)完畢的樣本、試劑均須作為醫(yī)療廢物處理，避免污染環(huán)境。
8．精子核蛋白染色試劑盒為體外診斷試劑，檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，對(duì)患者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其它實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況結(jié)合考慮。
規(guī) 格：20人份/盒、40人份/盒
存儲(chǔ)條件及有效期：試劑盒于2-8℃避光保存，有效期12個(gè)月
>> 精子形態(tài)學(xué)染色試劑盒（巴氏快速法）
>> 酸性磷酸酶染色液
