影響核酸提取效率的因素有哪些
更新時(shí)間：2021-10-29 10:07:32 關(guān)鍵詞：全自動(dòng)核酸提取儀
隨著疫情的到來，基本上我們每一個(gè)都做過核酸檢測(cè)了吧，可是核算是用什么設(shè)備檢測(cè)的大家知道嗎？其實(shí)核酸檢測(cè)的設(shè)備有不少，就比如全自動(dòng)核酸提取儀，它是基于磁珠提取法研制而成的一套高通量、高靈敏度的自動(dòng)核酸純化提取設(shè)備。它可在短時(shí)間內(nèi)利用機(jī)器磁棒架上的磁棒，將吸附有核酸的磁珠移動(dòng)至不同的試劑孔內(nèi)，經(jīng)過細(xì)胞裂解、核酸吸附、清洗與洗脫，之后得到高純度核酸。
一般核酸提取的主要步驟分為四步：裂解、吸附、洗滌和洗脫，每一步出現(xiàn)問題都會(huì)影響磁珠的提取效率。那么，影響核酸提取效率的因素有哪些？下面就一起隨朗逸醫(yī)療器械看看吧。
一、樣本裂解是裂解細(xì)胞或病原體，釋放里面的核酸。
影響裂解的主要因素有裂解液的成分及裂解的溫度和時(shí)間。
裂解液成分：對(duì)于一些難裂解的樣本，可以通過提高胍鹽濃度以及表面活性劑濃度來增強(qiáng)裂解液的裂解能力。
裂解溫度和時(shí)間：提高溫度和增加裂解時(shí)間可以讓細(xì)胞裂解更徹底，得到更多核酸，需要摸索合適的溫度和時(shí)間；溫度過高或時(shí)間過長，也有可能導(dǎo)致核酸斷裂或醇類揮發(fā)導(dǎo)致的提取效率下降。
二、吸附是磁珠吸附核酸的能力
影響吸附能力的有磁珠的吸附能力以及結(jié)合緩沖液的結(jié)合能力。磁珠吸附能力受到磁珠比表面積以及修飾基團(tuán)的密度影響。可根據(jù)實(shí)際樣本選擇磁珠粒徑和修飾基團(tuán)。
全自動(dòng)核酸提取儀
三、洗滌是去除DNA以外的RNA、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。
關(guān)系到核酸的純度，磁棒的振蕩幅度和混合時(shí)間會(huì)影響洗滌效率。磁棒振蕩幅度太小或混合時(shí)間太短，有雜質(zhì)殘留在磁珠上會(huì)影響磁珠吸附核酸的能力。振蕩太劇烈或時(shí)間太長，會(huì)丟失部分核酸或造成核酸的斷裂、降解，得率下降。
四、 洗脫是解離吸附在磁珠上的DNA，得到純度和濃度均很高的DNA，直接影響核酸得率
影響洗脫效率的因素有磁珠的干燥程度以及洗脫溫度和時(shí)間。磁珠未充分晾干，可能會(huì)有醇類等雜質(zhì)殘留，影響后續(xù) PCR 反應(yīng)；磁珠過分干燥，核酸可能會(huì)干結(jié)在磁珠上，導(dǎo)致洗脫效率下降。適當(dāng)提高洗脫溫度和時(shí)間，有利于核酸從磁珠上游離下來，時(shí)間過長或溫度過高，核酸有可能會(huì)降解，需要把握其中的平衡。
全自動(dòng)核酸提取儀能夠?qū)崿F(xiàn)自動(dòng)化、高通量操作，適用于疾病控制中心、臨床疾病診斷、輸血、出入境檢驗(yàn)檢疫、食藥監(jiān)、法醫(yī)學(xué)鑒定、環(huán)境微生物檢測(cè)、食品檢測(cè)、教學(xué)、科研、畜牧業(yè)和分子生物學(xué)研究等多種領(lǐng)域，尤其是對(duì)各地區(qū)爆發(fā)疫情需大規(guī)模核酸檢測(cè)起著至關(guān)重要的作用。
